自杀素 通过克拉米多马纳斯强硬菌的生产

科学领域:

• * 分子生物学 * 分子生物学
• * 生物技术 * 生物技术
• * 研究藻类的研究.

背景情况:

• * Chlamydomonas reinhardtii是光合作用,毛生物发生和生物燃料研究的重要模型生物.
• *CRISPR/Cas9基因编辑是一种强大的工具,但其在克拉米多蒙纳斯的效率受到细胞壁的限制.
• * 自溶素 (体溶素) 对于细胞壁消化至关重要,使CRISPR/Cas9成为可能,但目前的生产方法产生不一致的结果.

研究的目的:

• * 开发一种简单,可靠,高效的 Chlamydomonas reinhardtii 中自溶素生产协议.
• * 克服现有的自解素生产方法的局限性,这些方法阻碍了常规的CRISPR突变发生.
• * 提供一种易于使用的方法,用于生成针对性突变创造的关键酶.

主要方法:

• * 培养克拉米多莫纳斯细胞并通过一夜间化诱导游戏生成.
• *在2小时的潜伏期后,混合子体和收获自解酶.
• * 使用密集的液体悬浮剂进行细胞转移,最大限度地减少对精确细胞密度控制的需求.

主要成果:

• * 拟议的协议在自解素生产中显示出高效率,无论细胞密度如何.
• * 该方法需要最少的劳动力,并提供了一种简单的酶获取方法.
• * 实现了一致可靠的自解酶产量,促进了随后的CRISPR/Cas9应用.

结论:

• * 本协议提供了一种简单的,即时使用的解决方案,用于生产用于克拉米多马氏菌研究的必需自溶素.
• * 改进的自解素产生将显著提高使用CRISPR/Cas9.9的目标突变的常规生成.
• *这些发现支持 Chlamydomonas reinhardtii 作为基因工程和生物技术的底盘的更广泛应用.