滴滴数字PCR与实时PCR用于猪检测和量化协议的内部验证:一种人工重组等离子体方法
Umi Nuraeni1, Jekmal Malau2, Retno Tri Astuti3
1Laboratory of National Measurement Standards of Biology, The National Standard Agency of Indonesia (BSN), South Tangerang, Banten, Indonesia.
PloS one
|July 14, 2023
概括
一项新的研究比较了实时PCR (qPCR) 和数字PCR (dPCR) 来检测清真产品中的猪DNA. 数字PCR显示出更高的灵敏度,特别是在低度下,为认证提供了更可靠的结果.
科学领域:
- 食品科学 食品科学 食品科学
- 分子生物学分子生物学
- 分析化学 分析化学
背景情况:
- 在食品和药品检查中,真实性和可追溯性至关重要,特别是在全球清真食品市场.
- 准确的猪检测方法对于开发无猪认证和合格评估系统至关重要.
- 为了可靠的可追溯性,需要实时PCR (qPCR) 和滴滴数字PCR (ddPCR) 的标准化协议.
研究的目的:
- 为猪检测提出实时PCR (qPCR) 和滴滴数字PCR (ddPCR) 的标准化程序.
- 评估使用重组等离子体的qPCR和ddPCR方法的可追溯性和可靠性.
- 为监管机构提供科学数据,以开发可靠的猪检测协议.
主要方法:
- 作为放大标,使用了含有猪ATCB基因97bp片段的复合pUC57等离子体.
- 对qPCR和ddPCR进行了绝对量化和线性评估.
- 进行多个样本和跨参与测试,以评估方法的稳定性和适用性.
主要成果:
- 无论是qPCR还是ddPCR都显示出高精度 (R2值分别为0.9971和0.9998) 和可比的线性.
- 这两种方法在检测极限评估中都表现出高灵敏度.
- 滴滴数字PCR (ddPCR) 的灵敏度略高于qPCR,特别是在低DNA度下.
结论:
- 滴滴数字PCR (ddPCR) 为猪检测提供了更可靠的结果,特别是在分析少量的DNA (少于五个副本) 时.
- 在多个测试中,qPCR方法表现出高灵敏度,广泛适用性和稳定性.
- 这些发现支持开发用于猪检测的标准化qPCR协议,帮助像印度尼西亚这样的监管机构.
