一个3D打印的流细胞用于直接从溶酸盐净化电子显微镜样本的网上净化

科学领域:

• 结构生物学 结构生物学
• 生物物理学的生物物理.
• 生物化学 生物化学

背景情况:

• 低温电子显微镜 (cryo-EM) 和单粒子分析 (SPA) 承诺在最小的样本中确定近乎原生结构.
• 目前的冷电磁方法面临瓶,原因是高颗粒数量要求,难以采集的样品的度挑战,以及不一致的网格准备.
• 通过减少蛋白质生产需求和控制样本准备,探索网上亲和力净化来克服这些局限性.

研究的目的:

• 开发一个实用的在电网上的亲和力净化方法,以简化冷EM样本的准备.
• 展示一个可3D打印的流细胞装置,用于从原始生物样本直接 affinity 净化.
• 为研究人员提高先进的结构确定技术的可访问性.

主要方法:

• 开发一种可3D打印的流细胞装置,与标准实验室设备 (如液体色谱仪,环静电) 兼容.
• 利用基于氧化石墨烯的亲和网进行网上净化.
• 整合了流细胞与染色学连接器,用于控制样品结合和洗.

主要成果:

• 成功展示了从全细胞溶解物中进行网上亲和力净化的概念验证.
• 可3D打印的流量电池允许在亲和网上控制样品的结合和洗.
• 该设备与现有的实验室液体处理系统接口,简化工作流程.

结论:

• 开发的可3D打印的流动细胞为例行冷EM结构确定提供了实际的进步.
• 这种方法减少了对大量蛋白质的需求,并改善了对样本准备的控制.
• 网络净化技术的可访问性增加可以加速宏分子结构的确定.