一个使用人类原始细胞检测免疫调节化合物的高通量查协议
Katherine Chew1, Branden Lee1, Al Ozonoff2
1Precision Vaccines Program, Division of Infectious Diseases, Boston Children's Hospital, Boston, MA, USA.
STAR protocols
|July 15, 2023
概括
这项研究提出了使用人类外周血液单核细胞 (PBMCs) 选化合物的免疫作用的72小时协议. 它测量细胞因子释放和细胞激活标记物,帮助免疫调节器的发现.
科学领域:
- 免疫学和药理学
- 高通量选方法 高通量选方法
背景情况:
- 高通量查 (HTS) 能够快速评估化合物库的细胞毒性,免疫性和表型性影响.
- 人类外周血液单核细胞 (PBMC) 为研究人体免疫反应在体外提供了一个相关的模型.
- 开发高效的协议对于利用HTS在药物发现和免疫调节研究中至关重要.
研究的目的:
- 建立和验证一种用于刺激PBMCs和分析免疫反应的72小时协议.
- 为了使细胞因子分泌和细胞表面激活标记物的同时测量.
- 促进新型免疫调节剂和疫苗辅助剂候选者的发现.
主要方法:
- 用小分子库对冷保存的PBMC进行了72小时的刺激.
- 使用AlphaLISA试验量化了细胞因子分泌 (TNF-α,IFN-γ,IL-10) 的数量.
- 细胞表面激活标记物 (CD80,CD86,HLA-DR,OX40) 通过流细胞计分析.
主要成果:
- 该协议成功测量了关键细胞因子分泌水平.
- 实现了细胞表面激活标记者的同时分析.
- 开发了一种多重读取工作流程,用于全面的免疫分析.
结论:
- 这个经过验证的协议为免疫调节化合物查提供了一个强大的平台.
- 多重方法有助于潜在治疗剂的表型识别.
- 该方法支持发现新型疫苗辅助剂和免疫调节剂.
