增强了来自大肠杆菌的SARS-CoV-2主要蛋白酶 (Mpro) 的表达和溶解性
Rahul Ahuja1, Anupamjeet Kaur1, Geetika Kumari1
1National Institute of Immunology, New Delhi, 110067, India.
Protein expression and purification
|July 15, 2023
概括
研究人员优化了大肠杆菌BL21-DE3-RIL中SARS-CoV-2主要蛋白酶 (Mpro) 的表达,实现了药物查的高产量. 这种具有成本效益的方法使Mpro的大规模生产成为可能,用于开发新的抗病毒疗法.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 药物发现 药物发现 药物发现
背景情况:
- SARS-CoV-2 主蛋白酶 (Mpro) 对于病毒复制至关重要,也是关键的治疗点.
- 由于Mpro的跨变体保护性和与人类蛋白质酶的区别,使其成为药物开发的理想选择.
研究的目的:
- 为SARS-CoV-2 Mpro.建立一个具有成本效益的大规模生产方法.
- 描述纯化的Mpro,并评估已知化合物的抑制作用.
主要方法:
- 在大肠杆菌 (BL21-DE3和BL21-DE3-RIL) 中克隆和表达SARS-CoV-2 Mpro,并优化诱导.
- 通过亲和染色学净化Mpro.
- 使用质谱学,光谱学和循环二元化进行表征.
- 使用FRET和光火的抑制试验来评估GC376和奇托.
主要成果:
- 优化条件和BL21-DE3-RIL菌株显著增加可溶性Mpro表达.
- 纯化Mpro在与抑制剂结合 (GC376,奇托) 后呈现结构变化,表明功能保留.
- 酶活性测定证实了GC376和奇托桑对Mpro的显著抑制.
结论:
- 这种BL21-DE3-RIL菌株和优化的协议使得高产,高性价比的功能性SARS-CoV-2 Mpro.的生产成为可能.
- 这种可扩展的生产方法对于选潜在的治疗药物对抗SARS-CoV-2具有价值.
- 该研究验证了Mpro作为目标,并为抗病毒药物开发提供了一个平台.
