鱼衍生的单域抗体对绿色光蛋白的选择,鉴定和晶体结构
Yu-Lei Chen1, Xin-Xin Xie1, Peiyi Zheng2
1College of Ocean Food and Biological Engineering, Jimei University, Xiamen 361021, China.
International journal of biological macromolecules
|July 17, 2023
概括
研究人员开发了针对绿色光蛋白 (GFP) 的新型鱼抗体片段 (VNAR). 这些VNAR提供了更好的结合,并可以增强GFP在先进显微镜和细胞成像中的应用.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 新抗原受体 (VNAR) 的鱼可变域是小的,可设计的结合域.
- 绿色光蛋白 (GFP) 分析受到光谱特性和酸性环境中的火限制.
- 对于先进的应用,需要强大的抗GFP抗体.
研究的目的:
- 为了生成针对绿色光蛋白 (GFP) 的 VNAR.
- 描述生成的VNAR的结合亲和力和特异性.
- 评估VNARs在生物样本中检测GFP的有用性.
主要方法:
- 菌体显示器被用来选使用工程GFP变种 (eCGP123) 免疫鱼的VNAR.
- 使用KD测量来确定亲和力.
- 用X射线结晶学和免疫染色用于结构和功能表征.
主要成果:
- 确定了36个针对eCGP123的VNAR,其亲和度从6.76到605nm不等.
- 两个主要的VNARs,aGFP-14和aGFP-15,表现出纳米分子结合亲和力.
- aGFP-14与EGFP表现出交叉反应性,并在培养细胞和小鼠脑组织中成功标记EGFP.
结论:
- 来自鱼的VNAR可以有效地对抗GFP产生.
- 开发的VNARs,特别是aGFP-14,显示了作为GFP检测和成像工具的潜力.
- 这些发现扩大了GFP结合单域抗体 (sdAbs) 和它们的应用.


