基于CRISPR-Cas13a的测试用于准确检测OXA-48和GES碳烯质量
Concha Ortiz-Cartagena1,2, Daniel Pablo-Marcos3, Laura Fernández-García1,2
1Multidisciplinary and Translational Microbiology Group (MicroTM), Biomedical Research Institute of A Coruña (INIBIC), Microbiology Service, University Hospital of A Coruña (CHUAC), University of A Coruña (UDC), A Coruña, Spain.
Microbiology spectrum
|July 19, 2023
概括
使用LAMP和CRISPR-Cas13a技术的新诊断试验可以快速检测OXA-48和GES碳烯酶. 这种方法提供了高特异性和灵敏性,不需要核酸净化,改善了对抗卡巴胺的病原体的诊断.
科学领域:
- 分子诊断学 分子诊断学
- 抗微生物耐药性 抗微生物耐药性
- 在CRISPR-Cas系统中.
背景情况:
- 耐卡巴胺的病原体由于治疗和检测困难而构成重大临床挑战.
- 现有的诊断方法通常需要专门的设备和热循环,限制了现场应用.
- 克里斯普尔-卡斯系统,特别是卡斯13a,在核酸检测方面具有很高的特异性,可以与放大技术相结合.
研究的目的:
- 为OXA-48和GES碳烯酶开发一种快速,灵敏和特定的诊断试验.
- 创建一种绕过核酸净化和临床样本中的度的方法.
- 适应LAMP-CRISPR-Cas13a技术用于实际的临床微生物学应用.
主要方法:
- 开发一种新的测定方法,将循环介导同热放大 (LAMP) 与CRISPR-Cas13a结合起来.
- 利用Cas13a的附带分离活动在目标识别时生成信号.
- 在多样化的临床分离组中测试了测试方法,包括携带OXA-48或GES carbapenemases的Klebsiella pneumoniae,Enterobacter cloacae和Pseudomonas aeruginosa.
主要成果:
- 该LAMP-CRISPR-Cas13a测定实现了100%的特异性和灵敏性,用于检测OXA-48和GES碳化合物.
- 该测试在不到2小时内提供了结果,估计每次反应成本约为10欧元.
- 在没有先前核酸提取或净化的情况下,直接从临床样本中成功检测.
结论:
- 开发的LAMP-CRISPR-Cas13a测定是一种非常有效的工具,可以快速准确地检测OXA-48和GES碳烯基质.
- 这种测试克服了传统方法的局限性,消除了对专门设备和核酸净化的需求.
- 该试验具有显著的潜力,可以改善在临床环境中由耐卡巴胺细菌引起的感染的诊断和管理.
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