在人类胚胎干细胞分化成最终内皮细胞过程中,siRNA介导的TET1敲击的协议
Zhongqi Liufu1, Yujian Liu2, Jiangping He3
1Key Laboratory of Biological Targeting Diagnosis, Therapy and Rehabilitation of Guangdong Higher Education Institutes, The Fifth Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University, Guangzhou 510799, China.
STAR protocols
|July 19, 2023
概括
在人类胚胎干细胞 (ESC) 分化成最终内皮 (DE) 细胞过程中,TET-One (TET1) 酶介导的DNA去甲基化对激活内源逆转录病毒 (ERV) 至关重要. 本协议详细介绍了TET1敲击,以研究其在ERV激活和DE分化中的作用.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 发展生物学 发展生物学
- 表观遗传学 在表观遗传学中,表观遗传学是指表观遗传学.
背景情况:
- 内源逆转录病毒 (ERV) 是古代病毒感染的遗留物,集成到宿主基因组中.
- ERV激活与细胞分化过程有关,包括人类胚胎干细胞 (ESC) 的分化.
- TET1 (十-十一转位1) 是一种酶,参与活性DNA脱甲基化,这是一个关键的表观遗传机制.
研究的目的:
- 在人类ESC分化到最终内皮 (DE) 过程中,提出siRNA介导的TET1敲击的协议.
- 调查TET1在DE分化过程中的内源逆转录病毒 (ERV) 增强剂激活中的作用.
- 分析TET1淘汰对LTR6B甲基化,细胞形态和基因表达的影响.
主要方法:
- 诱导人体ESC进入DE细胞.
- 在分化过程中,siRNA介导的TET1的淘汰.
- 对LTR6BDNA甲基化,细胞形态和TET1敲击后基因表达的分析.
主要成果:
- 在ESC到DE分化过程中,TET1介导的DNA去甲基化对于ERV增强器激活至关重要.
- 降低TET1会影响LTR6B的甲基化模式.
- 在DE分化过程中,TET1倒置影响细胞形态和基因表达特征.
结论:
- 在人体ESC分化过程中,TET1在通过DNA脱甲基化来调节ERV激活起着至关重要的作用.
- 本方案使得研究TET1在表观遗传调节和细胞命运决定中的功能成为可能.
- 了解TET1的作用为我们提供了关于表观遗传控制发育和逆转录病毒元素活性的见解.
