使用单步逆转录重组酶聚合酶放大组合与侧向流水滴针测试相结合,快速和视觉检测阿克丁尼迪亚色环点相关病毒

科学领域:

• 植物病毒学 植物病毒学
• 分子诊断学 分子诊断
• 农业科学 农业科学

背景情况:

• 化环斑相关病毒 (AcCRaV) 对中国的果产量产生重大影响.
• 同感染病毒经常伴随AcCRaV,加剧对果生长,产量和质量的负面影响.
• 准确和快速的检测方法对于管理AcCRaV和减轻其经济影响至关重要.

研究的目的:

• 开发一种快速,灵敏和现场适用的AcCRaV.检测方法.
• 建立一个单阶段的反转录重组酶聚合酶放大与横流滴杆 (RT-RPA-LFD) 试验相结合,用于AcCRaV检测.

主要方法:

• 设计特定的原料和探针,以准AcCRaV外套蛋白基因的保护区域.
• 优化单步RT-RPA反应条件 (温度和时间).
• 整合RT-RPA反应与侧流量计 (LFD) 进行视觉结果读取.

主要成果:

• 一步RT-RPA-LFD测定在35-40°C时在10-30分钟内检测到AcCRaV,在5分钟内就能在LFD上获得结果.
• 该试验表明检测极限大约为20个病毒副本 (10-8 ng),匹配RT-qPCR灵敏度,并超过RT-PCR灵敏度的100倍.
• 该方法在原始植物提取物中成功检测到AcCRaV,整个过程在40分钟内完成.

结论:

• 开发的一步RT-RPA-LFD测定是一种简单,快速和高度敏感的工具,用于诊断基维植物中的AcCRaV.
• 这种测试代表了基维果病毒现场诊断的重大进步.
• 这是首次报告RT-RPA-LFD单步测定用于检测基维果病毒的应用.