再组合牛铁素H链的可溶性表达和净化
Haoyun Zhang1, Yiting Long1, Yongchong Peng1
1State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, 430070, China; College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan, 430070, China.
Protein expression and purification
|July 22, 2023
概括
有效地表达牛肥重链 (rFTH) 是其在药物输送和疫苗中的使用的关键. 这项研究详细介绍了一种成功的可溶性表达和净化策略,用于 prokaryotes 中的 rFTH.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 蛋白质表达方式
- 纳米粒子工程 纳米粒子工程
背景情况:
- 费里廷是药物交付和疫苗的有希望的平台.
- 再组合费里的高效生产对于其应用至关重要.
研究的目的:
- 开发一种可溶性表达策略,用于重组牛肥重链 (rFTH) 在 prokaryotic 系统.
- 建立一个改进的RFTH净化方法.
主要方法:
- 将rFTH基因结合到pET30a载体中,具有N端或C端的His标签.
- 优化表达条件 (温度,标签位置).
- 使用离子交换色谱,PEG沉和透析进行净化.
主要成果:
- 与N-终端的His-tag (N-His) 相比,C终端的His-tag (C-His) 导致了明显更高的RFTH溶解度.
- 在37°C时,rFTH与C-His的最佳可溶性表达达到90%以上.
- 纯化rFTH自组装成正规的,均大小的费里纳米颗粒.
结论:
- 为可溶性rFTH建立了一个强大的 prokaryotic 表达和净化策略.
- 这些发现支持开发用于生物技术应用的牛铁素纳米颗粒.
- 这项工作为可扩展生产基于费里的平台提供了基础.
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