大规模的微流体CRISPR选用于酵母酵母中胺酶分泌量的增加
S Andreas Johansson1, Thierry Dulermo2, Cosimo Jann1
1European Molecular Biology Laboratory (EMBL), Genome Biology Unit, Heidelberg, Germany. larsms@embl.de.
Lab on a chip
|July 24, 2023
概括
研究人员通过选CRISPR基因干扰来增强酵母中的重组蛋白质分泌. 调节参与囊泡贩运,细胞循环和能量供应的基因显著增加了α-氨酸酶分泌.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 酵母遗传学 酵母遗传学
背景情况:
- 通过分泌有效的重组蛋白质生产对生物技术至关重要.
- 了解蛋白质翻译,加工和出口的细胞通路对于优化生产至关重要.
研究的目的:
- 确定调节*Saccharomyces cerevisiae*中的α-氨酶分泌的基因和非编码RNA.
- 利用CRISPR技术进行大规模的基因查,以增强蛋白质分泌.
主要方法:
- 使用滴滴微流体查与全基因组CRISPR库结合在S. cerevisiae中.
- 编码和非编码基因的乱表达,以识别α-氨酶分泌的调节者.
- 通过基因过度表达和删除实验验验证的结果.
主要成果:
- 确定了345个影响α-氨酶分泌的基因.
- 发现调节囊泡贩运,内体-戈尔吉运输,巴哥组合,细胞循环和能量代谢中的基因可以增强分泌.
- 在涉及内体,戈尔吉和真空过程的基因附近发现了长非编码RNA.
结论:
- 基于CRISPR的查是一种强大的工具,用于识别改善蛋白质分泌的遗传标.
- 特定的细胞通路,包括与细胞内运输和能量相关的细胞通路,是增强重组蛋白质生产的关键目标.
- 非编码RNA也可能在调节蛋白质分泌途径方面发挥作用.
