开发基于CRISPR/Cas13a的测定方法,用于诊断杆菌病

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 寄生虫学的寄生虫学
• 医学诊断 医学诊断 医学诊断

背景情况:

• 杆菌病显著影响全球健康,需要改进的诊断工具来有效控制.
• 克里斯普尔技术为开发超敏感,特定,经济高效和便携式诊断测试提供了一个强大的平台.
• 现有的诊断方法需要加强用于现场应用和早期检测.

研究的目的:

• 开发和评估一个基于CRISPR的诊断平台,SHERLOCK (特定高灵敏性酶记者解锁),用于检测 Schistosoma japonicum 和 Schistosoma mansoni.
• 用实验动物模型和来自特有地区的人类样本评估SHERLOCK测定的诊断性能.

主要方法:

• 开发了SHERLOCK测定方法,将复合酶聚合酶放大 (RPA) 与CRISPR-Cas13a检测相结合.
• 使用光或色度测量读数进行测试测量.
• 使用150个感染小鼠的便/血清样本和189个来自菲律宾和乌干达的人类便/血清样本进行了评估.

主要成果:

• 在S. japonicum SHERLOCK测定显示了与定量PCR (qPCR) 93-100%的一致性.
• S. mansoni SHERLOCK测定表现出比qPCR更高的灵敏度,在老鼠血清中检测感染的时间早在感染后3周.
• 在人体样本中,与qPCR相比,S. mansoni SHERLOCK获得了100%的灵敏度.

结论:

• 基于CRISPR的SHERLOCK诊断显示出高精度,现场友好的护理点检测杆菌病的潜力.
• 这些测试代表了下一代的工具,用于对寄生虫被忽视的热带疾病的诊断和监测.
• 开发的SHERLOCK平台可以帮助全球控制和消除杆菌病的努力.