使用大肠杆菌显示器选择附体分子
Charles Dahlsson Leitao1, Linnea Charlotta Hjelm1, Stefan Ståhl1
1Department of Protein Science, KTH Royal Institute of Technology, 106 91 Stockholm, Sweden.
Cold Spring Harbor protocols
|July 25, 2023
概括
这项研究介绍了使用大肠杆菌细胞表面显示器选择附体结合物的协议. 这种方法可以通过磁激活细胞分类和光激活细胞分类进行高多样性库选,以有效地识别目标分子.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 蛋白质工程是指蛋白质工程.
背景情况:
- 亲体分子是小的,工程化蛋白质,对特定目标具有很高的亲和力.
- 定向进化是生成多样化的附体库的一个关键方法.
- 细胞表面显示系统促进了功能蛋白的选择.
研究的目的:
- 用大肠杆菌细胞表面显示来描述选择附体结合物的详细协议.
- 为了能够选高多样性的affibody库 (高达10^11).
- 使用细胞分类技术的组合优化绑定器选择.
主要方法:
- 创建高多样性的附属体库.
- 使用自传输系统 (例如,AIDA-I) 在大肠杆菌表面上显示附体库.
- 两个步骤的选择过程包括磁激活细胞分类 (MACS) 进行丰富和光激活细胞分类 (FACS) 进行最终选.
主要成果:
- 成功实施大肠杆菌细胞表面显示用于亲体库选择.
- 展示MACS用于有效的预先丰富和减少图书馆的多样性.
- 促进高吞吐量查和特定体结合剂的识别.
结论:
- 描述的协议提供了一个强大的方法来从大型库中选择affibody绑定器.
- 大肠杆菌细胞表面显示与MACS和FACS相结合,对于亲和蛋白发现是有效的.
- 该方法可适应各种自动运输车和替代显示系统.
