经过错误纠正的双重测序可以直接检测和量化人类TK6细胞中的突变,具有强大的实验室间一致性
Eunnara Cho1, Carol D Swartz2, Andrew Williams3
1Environmental Health Science and Research Bureau, Health Canada, Ottawa, ON, Canada; Department of Biology, Carleton University, Ottawa, ON, Canada.
概括
经过错误纠正的双重测序 (DS) 准确量化了人类细胞中由N-乙基-N-氨酸urea (ENU) 诱导的突变. 这种方法证明了在研究和监管环境中对化学变异性评估的高可重复性.
科学领域:
- 基因毒理学 基因毒理学
- 分子生物学分子生物学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 对公众健康和环境安全而言,化学物质的致变性评估至关重要.
- 量化突变的传统方法在灵敏度和范围上可能受到限制.
- 双重测序 (DS) 为检测低频突变提供了高精度的DNA测序.
研究的目的:
- 评估双重测序 (DS) 的实用性,以量化由N-乙烯-N-氨酸urea (ENU) 诱导的突变频率 (MF) 和频谱.
- 为了确定基于DS的突变性测试的最佳实验参数.
- 评估DS的实验室间可重复性,用于化学变异性评估.
主要方法:
- 人类淋巴细胞TK6细胞暴露于ENU (25-200μM).
- 使用DS变异性面板对2.4kb基因组区域进行DNA测序,在暴露后48,72和96小时进行测序.
- 分析了突变频率和光谱,并将结果与时间点,度和实验室进行了比较.
主要成果:
- 在这两家实验室中都观察到MF的显著,独立于时间的增加.
- 实验室之间的MF显示出强烈的正相关性 (r=0.97).
- 具体的突变类型 (C:G>T:A,T:A>C:G,T:A>A:T,T:A>G:C) 根据ENU度增加,其中C:G>T:A突变是普遍存在的.
- 跨基因地区的MF平均水平较高.
结论:
- DS提供了一种高度可复制和准确的方法来量化TK6细胞中ENU诱导的突变.
- 该研究证明了DS在可靠的化学变异性评估中的潜力,支持其在研究和监管评估中的使用.
- 暴露后48小时可能足以进行突变分析,简化了测试过程.
