在cryoFIB研磨过程中使用细胞二次电子成像定位细胞内容
Chao Lin1, Li Zhang1, Ziying Zhang1
1Key Laboratory for Protein Sciences of Ministry of Education, School of Life Sciences, Tsinghua University, Beijing 100084, China; School of Life Sciences, Tsinghua University, Beijing 100084, China; Tsinghua-Peking Joint Center for Life Sciences, Beijing 100084, China; Beijing Frontier Research Center for Biological Structure, Beijing 100084, China; Advanced Innovation Center for Structural Biology, Beijing 100084, China.
现在通过细胞二次电子成像 (CSEI) 更容易找到用于冷电子断层扫描 (cryoET) 的细胞结构. 这种方法增强了冷凝聚焦离子束 (cryoFIB) 研磨,用于在现场成像,无需额外的标签.
科学领域:
- * * 结构生物学 结构生物学
- * 细胞成像 细胞成像
- * 显微镜技术的使用
背景情况:
- *冷电子断层扫描 (cryoET) 可以在细胞和组织内的分子结构现场观察.
- *冷聚焦离子束 (cryoFIB) 研磨对于为冷ET准备样品至关重要.
- * 确定对大型生物样本具有兴趣的特定区域来进行冷FIB研磨是一个重大挑战.
研究的目的:
- * 引入和验证一种用于冷FIB削的新型飞行定位方法.
- * 证明细胞二次电子成像 (CSEI) 对于冷液化样本中细胞内容的高对比成像的实用性.
- * 建立一个精简的工作流程,用于冷ET样品的准备和分析.
主要方法:
- * 细胞二次电子成像 (CSEI) 的开发和应用与冷FIB仪器集成.
- *优化CSEI的成像原理和设置.
- * 测试CSEI可行性和可靠性在各种商业cryoFIB平台和削条件.
- *使用Chlamydomonas reinhardtii基体验证一个削本地化工作流程.
主要成果:
- * CSEI提供了冷水合生物样本中细胞内容的高对比成像,而不需要光标签或额外的设备.
- * CSEI 方法在不同削条件下证明在主流的冷FIB 仪器上是可行的和可靠的.
- * 开发的工作流程成功实现了局部化和研磨,用于随后的冷ET分析.
结论:
- * CSEI是一种有效的,无标签的成像技术,用于在冷FIB削过程中即时定位.
- * 这种方法克服了对任意生物样本应用冷ET的关键限制.
- * CSEI显著提高了使用cryoET进行现场结构研究的可访问性和效率.
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