一个高通量查系统,用于SARS-CoV-2的进入抑制,突触形成和细胞毒性

科学领域:

• 病毒学 病毒学
• 药物发现 药物发现 药物发现
• 细胞生物学 细胞生物学

背景情况:

• 严重急性呼吸道综合征冠状病毒2 (SARS-CoV-2) 通过Spike蛋白与人类血管素转化酶2 (hACE2) 结合进入宿主细胞.
• 抑制这种Spike-hACE2相互作用是开发安全的COVID-19抗病毒疗法的关键策略.

研究的目的:

• 建立一种高通量查 (HTS) 试验,用于识别SARS-CoV-2病毒进入抑制剂.
• 评估天然产品是否能够阻止SARS-CoV-2进入并评估其毒性.

主要方法:

• 使用了一种与BSL-2兼容的复制能力强的囊泡性口腔炎病毒 (VSV) 表达SARS-CoV-2尖端蛋白与eGFP记者 (VSV-eGFP-SARS-CoV-2).
• 采用重组允许细胞系统,共同表达 hACE2 和核/突触体标记物,用于实时成像和HTS.
• 选天然产品以识别抑制病毒进入的化合物和与ACE2结合的Spike-S1.

主要成果:

• 确定了六种天然产品,可显著抑制VSV-eGFP-SARS-CoV-2,毒性最小.
• 发现Scillaren A和17-Aminodemethoxygeldanamycin可以抑制Spike-S1与ACE2的结合.
• 实时成像显示了Scillaren A,Proscillaridin,Acetoxycycloheximide和Didemnin B的不同程度的突抑制.

结论:

• 开发了一种与BSL-2兼容的测试系统,该系统对针对SARS-CoV-2的病毒进入抑制剂的HTS有效.
• 测试平台可靠地选抗病毒化合物,并评估毒性和对合成细胞形成的影响.
• 建议对临床SARS-CoV-2分离物进行进一步研究,以验证化合物和查系统的实用性.