在C57BL/6小鼠中基于HDR的CRISPR/Cas9介导的PD-L1的淘汰

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 免疫学 免疫学 免疫学
• 遗传学 遗传学 是一个

背景情况:

• 编程细胞死亡配体1 (PD-L1) 是一种免疫抑制分子,与自身免疫,感染和癌症进展有关.
• 癌症和宿主细胞上的PD-L1表达与疾病进展相关.
• 生成PD-L1缺陷模型对于研究其生理和病理作用至关重要.

研究的目的:

• 描述一种使用CRISPR/Cas9系统在小鼠中敲除PD-L1的协议.
• 为进一步研究建立一个定义的功能丧失PD-L1小鼠模型.

主要方法:

• 利用CRISPR/Cas9基因编辑系统进行特定部位的DNA修饰.
• 针对PD-L1基因的第3个外显子,包含一个HindIII限制位,以诱导过早停止codon.
• 采用同质导向修复 (HDR) 进行精确的序列插入,同时考虑标准的非同质末端连接 (NHEJ).

主要成果:

• 成功生成了一个PD-L1淘汰赛小鼠模型,具有定义的过早停止代码.
• 描述的CRISPR/Cas9策略的效率和时间表与基于NHEJ的淘汰赛相似.
• 该协议促进了方便的创始人选,基因定型,并且可以适应其他基因标.

结论:

• 提出的CRISPR/Cas9协议为产生PD-L1缺陷小鼠提供了一种有效的方法.
• 这种方法在定义基因修饰,查和适应性方面为未来研究提供了优势.
• PD-L1淘汰模型是研究该分子在各种生物过程和疾病中的作用的宝贵工具.