来自大米种子 (Oryza sativa L.) 的d-cysteine desulfhydrase的识别,表征和应用

科学领域:

• 生物化学 生化学
• 植物科学 植物科学
• 酶学 是一种酶学.

背景情况:

• 半氨酸脱硫水解酶是催化酶,可催化半氨酸的降解.
• 了解这些酶在植物中的特定作用和特性对于代谢研究至关重要.

研究的目的:

• 为了净化和表征一种使用d-cysteine (D-cys) 作为基质的米种子中的囊脱硫酶.
• 确定编码酶的基因及其运动性质.
• 使用纯化的酶量化米粉中的D-cys水平.

主要方法:

• 使用各种染色学技术从大米种子中净化酶.
• 通过MALDI-TOF-MS和基因测序 (OsDCD1) 来识别蛋白质.
• 重组蛋白的表达和净化 (rOsDCD1).
• 酶动力学,活性测定和稳定性研究.
• 在米粉中量化D-cys.

主要成果:

• 一个由OsDCD1基因编码的426氨基酸蛋白被确定为利用d-cysteine的酶.
• 本源酶是一种同位体,在pH7.5和40°C时具有最佳活性.
• 动力学显示D-cys的K_m为136μM,V_max为45.5μmol/min/mg;l-cysteine作为一种非竞争性抑制剂.
• 米粉中D-cys的量化含量在0.76-0.93μmol/g之间,因米品种而异.

结论:

• OsDCD1基因编码一种大米氨酸脱硫酶,具有针对d-氨酸的特定活性.
• 描述的酶提供了一种可靠的方法来量化植物材料中的D-cys.
• 不同的水品种之间存在D-cys含量的显著差异.