凝蛋白提取对线性非标记MPT64蛋白质的形态表位的影响
Sri Agung Fitri Kusuma1,2, Muhammad Fadhlillah3,4, Tina Rostinawati1
1Department of Biology Pharmacy, Faculty of Pharmacy, Padjadjaran University, Sumedang 45363, Indonesia.
Gels (Basel, Switzerland)
|July 28, 2023
概括
与被动化相比,电化是净化MPT64蛋白质的优越方法,可以产生更纯的蛋白质,而不会改变其表皮质结构. 这种快速净化确保了抗体识别的抗原性.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 蛋白质化学 蛋白质化学
- 免疫学 免疫学 免疫学
背景情况:
- 再组合蛋白质的生产需要高效的净化方法.
- 蛋白质净化可以改变表位构造,影响抗体结合.
- 开发完整表位体的快速净化技术是必不可少的.
研究的目的:
- 调查细胞内MPT64蛋白质的有效,快速净化方法.
- 为了确保MPT64蛋白的表位结构在变化条件下保持不变.
- 为了比较MPT64净化产量和表皮质完整性的电溶和被动化.
主要方法:
- 从大肠杆菌中分离出来的重组MPT64蛋白质.
- 用于蛋白质分离和带切除的SDS-PAGE.
- 使用电和被动的净化.
- 通过MALDI-TOF MS质量指纹识别蛋白质.
- 通过Western blot使用IgG和IgY抗MPT64的抗体交叉反应性得到证实.
主要成果:
- 电和被动都产生了纯的MPT64蛋白质,由MALDI-TOFMS证实.
- 两种净化方法都没有改变MPT64蛋白质表位,保持特定抗体活性.
- 电电提供了显著更高的产量 (2030 ± 41 μg/mL),而不是被动 (179.5 ± 7.5 μg/mL).
结论:
- 电是MPT64蛋白质的更有效的净化方法.
- 在蛋白质产量和表皮质保存方面,电解脱超越了被动解脱.
- 这种方法可以生产适合免疫学应用的纯MPT64蛋白质.
