基于CRISPR核酶的并联侧流测定,通过设计的"锁定RNA/DNA"作为燃料来进行无放大miRNA检测
Benshun Tian1, Yuxin Wang2, Wuyue Tang2
1Medical Technology School, Xuzhou Medical University, Xuzhou, 221006, China; Department of Clinical Laboratory Medicine, Guangdong Provincial People's Hospital (Guangdong Academy of Medical Sciences), Southern Medical University, Guangzhou, Guangdong, 510000, China.
Talanta
|July 31, 2023
概括
一种新的双 CRISPR/Cas13a/Cas12a 机制 (tanCRISPR) 与侧向流量检测 (LFA) 结合,可以在没有放大的情况下提供灵敏,便携的 miRNA-21 检测. 这种tanCRISPR-LFA方法具有成本效益,适用于资源有限的环境.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 生物感应是一种生物感应.
背景情况:
- 克里斯普尔/卡斯生物传感器通常需要核酸放大来提高灵敏度,导致复杂,耗时和易受污染的程序.
- 目前的方法需要复杂的设备,这限制了CRISPR/Cas分析在资源有限的环境中的适用性.
研究的目的:
- 开发一个敏感和便携式的生物传感平台用于miRNA检测.
- 为了克服放大依赖的CRISPR/Cas生物传感器的局限性.
主要方法:
- 使用"锁定RNA/DNA"探针开发了一种双 CRISPR/Cas13a/Cas12a 机制 (tanCRISPR).
- 集成的tanCRISPR与侧向流量试验 (LFA) 用于便携式监测miRNA-21 (tanCRISPR-LFA).
主要成果:
- 在皮科莫拉 (pM) 水平达到检测极限,比Cas13a单独提高266倍,没有目标放大.
- 在检测MDA-MB-231细胞提取物中的miRNA-21水平方面,其表现与qRT-PCR相当.
- 验证了tanCRISPR-LFA系统的便携性,速度,灵敏度和低成本.
结论:
- tanCRISPR-LFA平台提供了一种灵敏,快速和便携式的miRNA检测方法.
- 这种方法消除了对核酸放大和复杂设备的需求.
- tanCRISPR-LFA显示出临床诊断的巨大潜力,特别是在资源有限的环境中.
