开发基于核酸的珠子阵列技术,用于检测Bacillus cereus
Prae Noppakuadrittidej1,2,3, Ratthaphol Charlermroj1, Manlika Makornwattana1
1National Center for Genetic Engineering and Biotechnology (BIOTEC), National Science and Technology Development Agency (NSTDA), Khlong Luang, Pathum Thani, Thailand, 12120.
Scientific reports
|August 1, 2023
概括
一种使用pyrrolidinyl核酸 (PNA) 的新型珠数组方法提供了一种快速而灵敏的方法来检测常见的食源性病原体Bacillus cereus. 这种高通量方法为确保食品安全的传统,耗时的方法提供了强大的替代方案.
科学领域:
- 食品安全和微生物学
- 生物技术和分子诊断学
- 核酸化学的核酸化学
背景情况:
- 谷菌是一种重要的食源性病原体,引起疾病.
- 目前的检测方法 (基于培养的,PCR) 是缓慢的,劳动密集的,或缺乏高通量能力.
- 需要快速,灵敏和高通量检测B. cereus的方法.
研究的目的:
- 开发一种强大的,高通量检测Bacillus cereus的方法.
- 为了利用具有prolyl-2-aminocyclopentanecarboxylic acid (ACPC) 骨干的pyrrolidinyl核酸 (PNA),提高特异性和结合性.
- 为了创建一个多重珠子阵列测定,同时检测多个B. cereus基因.
主要方法:
- 针对groEL,motB和16SrRNA基因的ACPC-PNAs对光条码珠的共价合.
- 开发一种用于检测B. cereus的珠子阵列试验.
- 测试试验的选择性,灵敏性和稳定性,使用基因组DNA和的食物样本 (牛奶,入菜).
主要成果:
- 开发的基于ACPC-PNA的珠子阵列显示出高选择性,仅检测B. cereus而不是其他物种.
- 对基因组DNA检测的灵敏度很高 (0.038-0.179 ng),由于更强的PNA结合,性能优于DNA探针.
- 该方法在复杂的食物矩阵 (如牛奶和入菜) 中表现出强度,干扰最小.
结论:
- 基于ACPC-PNA的珠子阵列是一种高度特定和敏感的方法来检测Bacillus cereus.
- 这种测试为食品传播病原体检测的传统方法提供了高吞吐量,快速和强大的替代方案.
- 概念验证证明了其作为一种有效的基于核酸的工具,以确保食品安全的潜力.
