在Saccharomyces cerevisiae中使用光定时库对终端降解子进行多重复合蛋白稳定性 (MPS) 分析

科学领域:

• 蛋白质组学是指蛋白质组学.
• 分子生物学分子生物学
• 酵母遗传学 酵母遗传学

背景情况:

• 蛋白质N终端序列通过细胞蛋白质分解途径批判性地调节蛋白质的稳定性和降解.
• 评估基因变化对N端加工和蛋白质稳定性的影响需要高通量方法.
• 协奏光计时器 (tFT) 为体内蛋白质循环量测量提供了一个强大的工具,独立于蛋白质丰度.

研究的目的:

• 开发和介绍一个多重复合蛋白稳定性 (MPS) 分析的协议.
• 为了使在酵母中蛋白质N-termini稳定性的全蛋白组研究.
• 为了评估蛋白质半衰期在多种不同的N-终端序列中的变化.

主要方法:

• 构建酵母图书馆,编码各种蛋白质N-终端融合到tFT记者中.
• 使用聚合策略进行光激活细胞分类,用于高通量图书馆选.
• 对排序池进行深度测序分析,以量化稳定性指数和半衰期变化.

主要成果:

• 在Saccharomyces cerevisiae中成功实施MPS分析.
• 对许多与tFT结合的N端的稳定性指数的生成.
• 由N端序列影响的蛋白质半衰期变化的量化.

结论:

• MPS分析提供了一种强大的,可扩展的方法来研究N端蛋白的稳定性.
• 这种方法有助于理解N端对蛋白质循环的控制.
• 该协议对于研究蛋白质分解途径和蛋白质稳态有价值.