来自模型和作物植物种子的蛋白质结合硫氨基酸的高通量绝对量化
Abou Yobi1, Huda Ansaf1, Ruthie Angelovici1
1Bond Life Sciences Center, Division of Biological Sciences, Interdisciplinary Plant Group, University of Missouri, Columbia, Missouri.
Current protocols
|August 4, 2023
概括
我们开发了一种快速的方法,使用LC-MS/MS精确测量植物种子中的氨酸和氨酸. 这种高通量协议可以从小组织样本准确量化这些必要的硫氨基酸.
科学领域:
- 农业科学 农业科学
- 生物化学 生物化学
- 分析化学 分析化学
背景情况:
- 准确量化硫氨基酸,氨酸 (Cys) 和氨酸 (Met),对于植物营养和作物改善至关重要.
- 目前用于分析与蛋白质结合的Cys和Met的方法可能耗时且需要更大的样本量.
- 开发一种高通量,精确的方法对于大规模的种子分析至关重要.
研究的目的:
- 描述一种用于绝对量化植物种子中与蛋白质结合的Cys和Met的新型高通量协议.
- 为了优化协议的速度,准确性和最小的样本要求.
- 为了验证协议在不同植物物种中的适用性.
主要方法:
- 通过酸氧化,将Cys转化为囊酸 (CysA) 和Met转化为硫二甲 (MetS).
- 酸解,然后用稳定同位素标记的内部标准 (DL-Ser-d3和L-Met-d3) 提取水.
- 使用多重反应监测串联质谱法 (LC-MS/MS) 进行绝对量化,采用96井板设置.
主要成果:
- 该协议允许每周对数百个样本进行高吞吐量分析.
- 每个样本只需要大约4毫克的植物组织.
- 在量化Cys和Met.中表现出高精度,准确性和可重复性.
- 优化用于Arabidopsis thaliana,Glycine max和Zea mays种子,具有其他植物组织的潜力.
结论:
- 该协议提供了一种可靠和有效的方法,用于植物种子中蛋白质结合的Cys和Met的绝对量化.
- 高通量性质和低样本要求使其适用于大规模的作物研究和营养分析.
- 该方法对各种植物组织的适应性扩大了其在植物科学中的实用性.
