滴滴数字PCR作为一种工具,用于检测耐药的Dirofilaria immitis分离体
Sohini Kumar1, Roger K Prichard1, Thavy Long1
1Institute of Parasitology, McGill University, 21111 Lakeshore Road, Sainte-Anne-de-Bellevue, H9X3V9, QC, Canada.
概括
一种新的滴滴数字PCR方法快速检测犬心虫 (Dirofilaria immitis) 中宏环乳耐药性的遗传标记. 该工具有助于识别耐药寄生虫,并监测犬种群的耐药性.
科学领域:
- 兽医寄生虫学 兽医寄生虫学
- 分子诊断学 分子诊断
- 抗寄生虫药物耐药性 抗寄生虫药物耐药性
背景情况:
- 狗心病的预防依赖于宏环乳 (MLs).
- 在Dirofilaria immitis中出现的耐药性对有效的预防构成重大威胁.
- 目前检测耐药性的方法有限,阻碍了准确的诊断和监测.
研究的目的:
- 开发一种快速且具有成本效益的诊断试验,用于检测D. immitis.中与ML耐药性相关的遗传标记.
- 验证一个滴滴数字PCR (ddPCR) 协议,用于识别与药物耐药性相关的单核酸多态 (SNP).
- 评估ddPCR在区分易感,耐药和混合基因型D. immitis分离物之间的有用性.
主要方法:
- 开发一种特定的滴滴数字PCR (ddPCR) 协议,使用定制的原始剂和水解探头.
- 针对与ML耐药性相关的十种先前识别的单核酸多态 (SNP).
- 将ddPCR结果与MiSeq测序数据和D. immitis分离物的表型耐药性概况进行比较.
主要成果:
- 在 ddPCR测定准确地检测和定量SNP在敏感 (密苏里州) 和耐药 (JYD-34) D. immitis分离.
- SNP1和SNP2被确定为特别可预测的标记物,用于快速检测ML耐药性.
- 该试验成功识别了易感,耐药和混合基因型的隔离物,表明其能够检测异构的寄生虫种群.
结论:
- 滴滴数字PCR提供了一种灵敏,快速和潜在的更容易获得的方法来检测D. immitis.中ML耐药性的遗传标记.
- 这种ddPCR测定可以区分易感和耐药寄生虫感染,包括混合感染.
- 开发的ddPCR协议是流行病学调查,个体隔离评估和监测狗心虫药物耐药性发展的宝贵工具.
