硫酸L-氨酸减少了固定金属亲和色谱中的不可逆转的蛋白质结合
Markus Mozgovicz1, Andreas Fischer2, Cécile Brocard3
1Austrian Centre of Industrial Biotechnology, Vienna, Austria; Department of Biotechnology, Institute of Bioprocess Science and Engineering, University of Natural Resources and Life Sciences, Vienna, Austria.
为了减少固定金属亲和色谱 (IMAC) 过程中的蛋白质损失,研究人员研究了不可逆转的吸附动力学. 硫酸L-氨酸有效地阻止了蛋白质的展开,并减少了静止相污染.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 化学工程是化学工程的重要组成部分.
- 染色体学 染色体学 是一种染色学.
背景情况:
- 固定金属亲和色谱 (IMAC) 对于生物制药净化至关重要.
- 蛋白质展开和不可逆转的吸附在静止阶段损害恢复,并导致污染.
- 了解吸附动力学对于优化IMAC过程至关重要.
研究的目的:
- 为了研究不可逆转的蛋白质酶吸附到IMAC树脂上的动力学.
- 评估辅溶剂,特别是l-氨酸对防止蛋白质展开和减少IMAC污染的影响.
- 为了比较不同l-素反离子 (硫酸盐与) 在缓解不可逆吸附的有效性.
主要方法:
- 在几个小时内测量了不可逆向吸附的动力学.
- 纳米差异扫描热量计 (纳米-DSC) 用于评估热稳定性和展开.
- 进行了批量吸附实验,以验证与辅溶剂的发现.
主要成果:
- 随着时间的推移,IMAC树脂上的蛋白质酶的不可逆向吸附增加,与蛋白质展开温度的降低相关.
- "软"蛋白质表现出明显的时间依赖的不可逆向吸附的增加.
- 根据热数据显示,L-氨酸在防止蛋白质展开方面具有有益作用,并在吸附实验中得到证实.
结论:
- 蛋白质展开和不可逆转的吸附动力学是时间依赖的,特别是对于"软"蛋白质,影响IMAC的效率.
- 在减缓不可逆转的蛋白质吸附和减少IMAC静态相污染方面,L-酸比l-酸更有效.
- 战略性的使用添加剂,如酸可以显著改善生物制药回收在IMAC过程中.
更多相关视频
06:45Author Spotlight: Affinity Purification of a Fibrinolytic Enzyme from Sipunculus nudus
Published on: June 2, 2023
08:02Benchtop Immobilized Metal Affinity Chromatography, Reconstitution and Assay of a Polyhistidine Tagged Metalloenzyme for the Undergraduate Laboratory
Published on: August 23, 2018
相关概念视频
Factors Affecting Protein-Drug Binding: Drug-Related Factors
One crucial factor in drug-protein binding is the drug's lipophilicity or its affinity for fat. More lipophilic drugs tend to have higher binding extents. For example, highly lipophilic drugs like cloxacillin exhibit substantial protein binding, with as much as 95% of the drug binding to proteins. In...
Affinity Chromatography
Drug Distribution: Plasma Protein Binding
Extraction: Advanced Methods
