获得高产量的复合Enterococcus faecium尼古丁酸核酸腺转移酶用于X射线晶体学和生物物理研究
Olamide Jeje1, Ramesh Pandian1, Yasien Sayed1
1Protein Structure-Function Research Unit, School of Molecular and Cell Biology, Faculty of Science, University of the Witwatersrand, Johannesburg 2050, South Africa.
International journal of biological macromolecules
|August 6, 2023
概括
研究人员确定了Enterococcus faecium尼古丁酸核酸氨基转移酶 (EfNNAT) 的结构,这是细菌生存的关键酶. 这些结构数据将有助于开发针对细菌病原体的新药.
科学领域:
- 结构生物学 结构生物学
- 生物化学 生物化学
- 微生物学 微生物学
背景情况:
- 尼古丁酸核酸腺转移酶 (NNAT) 对于NAD+生物合成至关重要,对细菌病原体的生存至关重要.
- 在此之前,Enterococcus faecium NNAT (EfNNAT) 的结构功能关系是未知的.
- 在抗微生物药物开发过程中,NNAT是潜在的可用药物的目标.
研究的目的:
- 建立一个有效的协议来表达和净化重组EfNNAT.
- 为了确定EfNNAT的三维结构.
- 为了了解EfNNAT的基质结合,并为基于结构的抑制剂的开发提供信息.
主要方法:
- 使用大肠杆菌和IMAC的高产重组EfNNAT表达和净化.
- 生物物理特征,包括对二次结构组成的评估.
- X射线晶体学以确定EfNNAT在原生和腺因结合形式中的高分辨率结构.
主要成果:
- 一个强大的协议产生了超过101毫克的>98%纯重组EfNNAT.
- 生物物理研究表明,EfNNAT是一种二元蛋白质,含有高α-螺旋的含量.
- 高分辨率的晶体结构揭示了基质结合部位中的酸盐和硫酸盐离子,这表明基质偏好并解释了对β-尼古丁胺胺单核酸缺乏亲和力.
结论:
- 这项研究提供了EfNNAT.的第一个高分辨率结构.
- 这些结构为酶的活性部位和基质相互作用提供了关键的见解.
- 这些发现为基于结构的药物发现奠定了基础,以向Enterococcus faecium中的EfNNAT.
