在非模型植物病原体Sphaerulina musiva中使用CRISPR-Cas9核糖蛋白复合体建立基因组编辑工具

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 遗传学 遗传学 是一个
• 植物病理学 植物病理学

背景情况:

• CRISPR-Cas9是一种强大的基因组编辑工具,用于特定地点的DNA修改.
• 高效的基因编辑方法对于非模型生物,特别是丝状真菌至关重要.
• 斯法鲁利纳木斯维亚是一种严重的病原体,威胁着Populus,这是一个重要的生物能源作物.

研究的目的:

• 在模型真菌Trichoderma reesei中建立CRISPR-Cas9基因组编辑.
• 开发非模型真菌病原体Sphaerulina musiva的第一个高效的转化协议.
• 为其他非模型丝状真菌提供工程框架.

主要方法:

• 使用 Cas9/sgRNA 核糖蛋白复合体 (RNP) 进行基因组编辑.
• 在两种物种中都使用了为CRISPR-Cas9 RNP传递的分离原生体.
• 开发了用于单导向RNA (sgRNA) 设计的计算验证.
• 选针对的基因组编辑事件.

主要成果:

• 在Trichoderma reesei中成功利用了CRISPR-Cas9.
• 建立了第一个有效的基于CRISPR-Cas9的Sphaerulina musiva转换协议.
• 证明了sgRNA设计和计算验证的实用性.
• 展示了由原生质介导的RNP输送的有效性.

结论:

• 开发的CRISPR-Cas9系统和转换协议对S. musiva.有效.
• 这项工作促进了S. musiva的遗传研究,包括病原性和二次新陈代谢.
• 该方法为设计其他非模型子载体虫提供了一条途径.
• 这项研究支持开发针对S. musiva.的遗传缓解策略.