FRET导致了在流细胞计中紫色激光激发的光素引发误导信号

科学领域:

• 免疫学 免疫学 免疫学
• 生物技术是生物技术.
• 分析化学 分析化学

背景情况:

• 免疫标记中的多重色素可以引起光谱干扰.
• 光共振能量转移 (FRET) 是一种已知的现象,可以导致意想不到的信号.
• 之前在T细胞克隆性分析中的FRET观察涉及PE-Cy7和APC-Alexa750.0.

研究的目的:

• 报告太平洋蓝 (PB) 和FITC色素之间的新型FRET效应.
• 在T细胞分析中调查V550 (Krome Orange; KrO) 检测器上意外信号的原因.
• 为了突出FRET在多色流细胞计仪面板设计中可能导致误导结果的潜力.

主要方法:

• 新鲜的全血被涂上一个面板,包括抗CD3-PB,CD8-KrO,Vbeta FITC,Vbeta PE和CD4 AA750.
• 细胞被固定,经过红色溶解处理,洗,并在DxFlex细胞计上进行分析.
• 使用Kaluza软件进行了数据分析,包括色素的光谱分析.

主要成果:

• 在所有Vβ FITC阳性T细胞上观察到一个意想不到的CD8dim-KrO (V550) 信号,当被紫色激光激发时.
• 通过对抗CD3-PB和抗Vβ-FITC抗体的存在的依赖,证实了PB和FITC之间的这种FRET效应.
• 与抗TCR马三角FITC也观察到FRET,但与与CD3-TCR复合体无关的其他FITC标记抗体没有观察到FRET.

结论:

• 由紫色激光激发的太平洋蓝 (PB) 和FITC之间的FRET效应首次被描述.
• 这种PB-FITC FRET可能会导致误导信号,特别是在标记密切相关的标记物时,如CD3和TCR Vβ.
• 在设计多色流细胞计面板时,仔细考虑FRET至关重要,以避免误解.