通过可诱导的ER检索进行侧向检测,使得研究Plasmodium分泌的蛋白质具有独特的方法
Manuel A Fierro1, Tahir Hussain1, Liam J Campin2
1Department of Biomedical Sciences, Iowa State University, Ames, IA 50011.
概括
我们开发了KnockER,这是一种研究疟疾寄生虫分泌的蛋白质的新方法,通过将它们困在急诊室. 这种工具使得对重要寄生虫蛋白质的功能丧失研究成为可能.
科学领域:
- 分子寄生虫学 分子寄生虫学
- 细胞生物学 细胞生物学
- 药物发现 药物发现 药物发现
背景情况:
- 疟疾寄生虫依赖于宿主细胞内分泌的蛋白质来生存.
- 现有的研究这些蛋白质的方法有限,阻碍了对它们功能的研究.
研究的目的:
- 为了引入和验证KnockER,一个新的DiCre介导的Knock-sideways系统.
- 为了使分泌蛋白质在功能丧失研究中能够有条件的ER封存.
- 调查塑菌分泌的蛋白质的贩运和功能.
主要方法:
- 通过将分泌的蛋白质与使用DiCre重组酶的KDEL ER检索序列融合而开发出KnockER.
- 应用KnockER研究针对不同细胞区的多种类型的菌蛋白.
- 评估了ER封存对寄生虫生存能力和蛋白质功能的影响.
主要成果:
- 被分泌的蛋白质的有条件ER封存通常是无毒的,允许功能丧失研究.
- 使用 knockER 分析了参与类细胞,类细胞,密集颗粒和寄生虫真空球功能的蛋白质.
- 发现真空HSP101水平超过了对效应器出口的要求,与PTEX150.0.不一样.
结论:
- knockER是一个多功能工具,用于剖析与分区分辨率在Plasmodium分泌的蛋白质的功能.
- 这种方法有助于研究蛋白质的贩运和功能在基因可处理的真核生物.
- 提供了对基本寄生虫分泌蛋白质的调节和功能的新见解.
