使用纳米化酶生物发光共振能量转移 (NanoBRET) 试验测量细胞中的蛋白质与蛋白质相互作用
Magdalena M Szewczyk1, Dominic D G Owens1, Dalia Barsyte-Lovejoy2,3
1Structural Genomics Consortium, University of Toronto, Toronto, ON, Canada.
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
|August 9, 2023
概括
在活细胞中,NanoBRET使用Nanoluciferase和HaloTag.量化蛋白质与蛋白质相互作用 (PPI). 这种强大的方法可以实时测量PPI,这对于理解细胞网络和开发疾病治疗至关重要.
科学领域:
- 生物物理学的生物物理.
- 细胞生物学 细胞生物学
- 分子相互作用 分子相互作用
背景情况:
- 蛋白与蛋白相互作用 (PPI) 对细胞功能和疾病机制至关重要.
- 在它们的原生细胞环境中量化PPI在技术上是具有挑战性的.
- 生物发光共振能量转移 (BRET) 提供了一种生物物理方法来测量PPI.
研究的目的:
- 展示NanoBRET作为一种多功能和强大的系统,用于在活细胞中进行定量PPI测量.
- 详细介绍一个NanoBRET测试实施和优化的协议.
- 为了证明NanoBRET在研究受小分子和遗传修饰影响的PPI中的实用性.
主要方法:
- 用于纳米BRET的纳米化酶 (捐赠者) 和HaloTag-ligand (接受者).
- 开发了一种表达NanoLuc和HaloTag融合蛋白的协议.
- 优化了NanoBRET测定条件,用于活细胞分析.
主要成果:
- 在实时中,NanoBRET准确地量化了PPI.
- 在测量蛋白质,域和之间的相互作用方面表现出灵敏度.
- 在活细胞中成功量化了PPI抗剂化合物活性.
结论:
- 纳米BRET是一种可靠而敏感的方法,用于研究活细胞中的PPI.
- 该协议促进了PPI动态和调制的调查.
- 在药物发现和了解细胞信号通路方面,NanoBRET非常有价值.
