来自大肠杆菌的抗微生物BSN-37的可溶性表达通过SUMO融合技术

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 分子生物学分子生物学
• 生物化学 生物化学

背景情况:

• 抗微生物 (AMP) 对抗微生物感染的天生的免疫力至关重要.
• 牛的AMP BSN-37显示出显著的抗菌性质.
• 有限的自然资源限制了AMP BSN-37的可用性,用于研究和潜在的应用.

研究的目的:

• 开发一种用于高效表达和净化牛AMP BSN-37.7.的重组DNA策略.
• 为了优化AMP BSN-37在大肠杆菌 (大肠杆菌) 中可溶性表达的条件.
• 为了验证复合产生的AMP BSN-37.7.的生物活性.

主要方法:

• 对于大肠杆菌表达的AMP BSN-37基因的Codon优化.
• 克隆到pCold-SUMO向量中进行融合蛋白表达.
• 再组合等离子体的构造,识别 (PCR,酶消化,测序) 和转化为BL21大肠杆菌.
• 优化IPTG度和化时间的诱导表达.
• 通过染色学净化SUMO-BSN-37融合蛋白.
• 使用SUMO蛋白酶,裂解融合蛋白释放BSN-37.
• 使用SDS-PAGE和Western blotting进行识别和活动评估.

主要成果:

• 成功地构建和识别了复合等离子体pCold-SUMO-BSN-37.
• 优化表达条件确定为37°C,0.4μM IPTG和6小时化.
• 实现了可溶性SUMO-BSN-37融合蛋白的大规模净化.
• 西方涂抹证实了融合的成功表达和活性.
• 重组生成的BSN-37表现出与合成的BSN-37.7相比的抗菌活性.

结论:

• 建立了一种可靠的方法,用于在大肠杆菌中可溶性表达和净化牛肉AMP BSN-37.
• 这种重组方法有效地解决了自然AMPBSN-37可用性有限的挑战.
• 这些发现为进一步研究和AMP BSN-37.7的潜在治疗开发提供了基础.