简单,坚固和可重复的在线酸切割蛋白质在移动阶段的快速定量LC-MS自下而上的蛋白质分析――素检测应用程序

科学领域:

• 蛋白质组学是指蛋白质组学.
• 分析化学 分析化学
• 生物化学 生物化学

背景情况:

• 蛋白质样本的准备,包括蛋白质分裂成,对于自下而上的蛋白质组学至关重要.
• 目前的方法往往耗时和劳动密集,在蛋白质组工作流中造成瓶.

研究的目的:

• 开发一种快速的在线方法,用于直接在液态染色体质谱 (LC-MS) 移动阶段注射后的蛋白质酸分裂.
• 为了实现快速的生成和分离,以便进行高效的蛋白质组分析.

主要方法:

• 用0.1%的酸在加热的毛细血管 (195°C) 中切割蛋白质,放置在分析柱前.
• 在线分离被优化为速度 (35秒) 和效率,集成到标准LC-MS工作流程中.

主要成果:

• 该方法产生了几乎覆盖特斯图祖马布整个序列的,证明了高裂解效率.
• 定性结果显示出优异的长期稳定性,该方法被证明适用于准确,可重复的量化.
• 通过在7-8分钟内从10ng注射中实现明确的金检测,证明了实用的实用性.

结论:

• 在线开发的酸分裂方法显著加速了蛋白质样本的蛋白质组学准备.
• 该技术是稳固的,可重复的,适用于定性和定量蛋白质组分析.
• 它的简单性和缺乏专业要求使其在高通量实验室中无采用.