单细胞ICP-ToF-MS用于蛋白质的多重确定:细胞应激反应的评估
Paula Menero-Valdés1, Michail I Chronakis2, Beatriz Fernández1
1Department of Physical and Analytical Chemistry, University of Oviedo, Julián Clavería 8, 33006 Oviedo, Spain.
Analytical chemistry
|August 11, 2023
概括
一种新方法使用金属纳米标记抗体和红色染色与单细胞ICP-ToF-MS测量人类细胞中的蛋白质度. 该技术量化蛋白质质量和相对度,使得在压力下分析细胞亚群.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分析化学 分析化学
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 精确量化单个细胞中的蛋白质度对于理解细胞过程至关重要.
- 现有的方法往往缺乏单细胞分析的灵敏度或吞吐量.
- 开发用于单细胞蛋白质分析的强大策略是一个持续的挑战.
研究的目的:
- 提出一种自动化和简单的策略,用于确定人类单个细胞中相对蛋白质度.
- 使用单细胞诱导合等离子体飞行时间质谱法 (sc-ICP-ToF-MS) 来量化蛋白质.
- 建立一种在不同条件下分析细胞亚群的方法.
主要方法:
- 采用金属纳米集群 (NC) 标记的针对蛋白的特定抗体.
- 使用红色 (RR) 染色来确定细胞事件数和相对细胞体积.
- 应用sc-ICP-ToF-MS来量化ARPE-19单个细胞中的蛋白质质量和度.
主要成果:
- 证明了用于量化hepcidin,metallothionein-2和ferroportin表达的概念证明.
- 建立了RR强度和细胞体积之间的关系 (细胞体积 (Ru强度) 3/2).
- 成功地将对照ARPE-19细胞与高血糖和氧化应激条件下的细胞进行了比较,确定了子群.
结论:
- 拟议的sc-ICP-ToF-MS策略允许精确确定单个细胞中的蛋白质质量和相对度.
- 该方法允许分析细胞对不同压力条件和补充剂的反应.
- 这种方法对于细胞培养的比较研究和识别不同的细胞亚群非常有价值.
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