基于D,D-碳酸酶过度表达诱导的Vibrio natriegens细胞增强透性的新型表达系统
Ľubica Kormanová1, Zdenko Levarski2,3, Andrej Minich2
1Faculty of Natural Sciences, Comenius University in Bratislava, Ilkovičova 6, Bratislava, 811 04, Slovak Republic. kormanova10@uniba.sk.
World journal of microbiology & biotechnology
|August 11, 2023
概括
在Vibrio natriegens中过度表达D,D-carboxypeptidases可以增强膜的透性,从而允许无标签的细胞外蛋白质的产生. 这种快速生长的细菌为高效的重组蛋白净化提供了一个新的平台.
科学领域:
- 微生物学 微生物学
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 维布里奥纳特里根是一种快速生长的,具有工业潜力的非致病性海洋细菌.
- D,D-carboxypeptidases是细菌细胞壁生物合成中的关键酶.
研究的目的:
- 为了研究过度表达D,D-carboxypeptidases对V. natriegens膜完整性的影响.
- 评估使用该系统用于细胞外,无标签的重组蛋白质生产的可行性.
主要方法:
- 在V. natriegens.中对D,D-carboxypeptidases的同时表达.
- 对膜透性和蛋白质泄漏的分析.
- 通过IMAC染色学净化复合蛋白质 (AfKatG,MDBP,Taq聚合酶).
主要成果:
- 过度表达D,D-carboxypeptidases增加了膜透性和细胞外蛋白质泄漏.
- 直接从生长基中获得高产的无标签重组蛋白质.
- 对AfKatG,MDBP和Taq聚合酶的净化产量分别为117.9 ± 56.0 mg/L,36.5 ± 12.9 mg/L和26.5 ± 6.0 mg/L.
结论:
- V. natriegens可以被设计为有效的细胞外生产无标签的重组蛋白质.
- 该系统简化了蛋白质净化,降低了下游加工成本.
- 这种方法广泛适用于各种重组蛋白.
