反向转录可以对BCR::ABL1定量实时RT-PCR的诊断结果产生重大影响
Birgit Spiess1, Helga Kleiner1, Irina Tarnopolscaia1
1Department of Hematology and Oncology, Medical Faculty Mannheim, Heidelberg University, 68167 Mannheim, Germany.
Cancers
|August 12, 2023
概括
反转录酶 (RT) 类型和cDNA原始化显著影响慢性髓性白血病 (CML) 监测中的BCR::ABL1量化. 优化这些因素对于准确的诊断数据和实验室间协调至关重要.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 临床诊断 临床诊断 临床诊断
- 血液学 血液学 血液学
背景情况:
- 反转录酶 (RTs) 对于监测慢性髓性白血病 (CML) 中的BCR::ABL1融合转录至关重要.
- 逆转录PCR (qRT-PCR) 数据的定量逆转录PCR (qRT-PCR) 数据中可以引入偏差,影响诊断准确度.
研究的目的:
- 为了比较评估不同RT (MLV和SuperScript IV) 和原始化方法 (随机六合体与特定目标) 的性能,用于BCR::ABL1监测.
- 确定影响BCR::ABL1 qRT-PCR.诊断数据变化的因素.
- 为改善测定灵敏度和实验室间协调提供建议.
主要方法:
- 使用了AcrometrixTM BCR::ABL1参考面板和37个临床标本.
- 进行定量RT-PCR,将MLV和SuperScript IVRT与随机六合体和特定目标原始化进行比较.
- 分析了不同组合在处理低复制 (BCR::ABL1) 和高复制 (GUSB,ABL1) 目标中的有效性.
主要成果:
- 确定RT类型和原始化方法是诊断数据变化的主要来源.
- 与高副本GUSB或ABL1目标相比,在处理低副本BCR::ABL1目标时观察到差异.
- 超级脚本IV在处理低复制和高复制目标方面的损害没有反映在诊断日志 (BCR::ABL1/GUSB%) 值中.
- 优先考虑家政基因表征和最大限度地提高家政基因拷贝是必不可少的.
结论:
- 增加RNA/cDNA数量和使用不同的RT/原始组合可以提高BCR::ABL1测定灵敏度.
- 为了实现实验室间的协调,在改变RT等级时必须重新评估转换因子.
- 准确地表示家庭和BCR::ABL1目标对于可靠的CML监测至关重要.
