开发,优化和验证LC-MS/MS方法用于确定DBS GALT酶活性
Muhammet Topbaş1, Erhan Canbay1, Ebru Sezer1
1Department of Medical Biochemistry, Faculty of Medicine, Ege University, Bornova, Izmir, 35100, Turkey.
Analytical biochemistry
|August 12, 2023
概括
一种新的液体染色体质谱法 (LC-MS/MS) 方法准确地测量了干血斑块中的银河糖-1-酸盐尿基转移酶 (GALT) 酶活性. 这种强大的测定方法可以更好地检测GALT缺乏症,这对于诊断银河系血病至关重要.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 临床化学 临床化学
- 代谢障碍 代谢障碍 代谢障碍
背景情况:
- 银血症是一种严重的碳水化合物代谢障碍.
- 银血症的诊断依赖于检测银-1-酸盐尿基转移酶 (GALT) 缺乏.
- 目前的GALT活动测定有局限性,需要改进诊断方法.
研究的目的:
- 开发和验证一种可靠的液态染色体质谱法 (LC-MS/MS) 方法,用于量化干血斑样 (DBS) 中的GALT活性.
- 将LC-MS/MS方法与传统的度方法进行比较.
- 优化样本采集和处理,以准确测量GALT活动.
主要方法:
- 开发了一种LC-MS/MS测定方法,使用[13C6]-银糖-1-酸盐作为基质,并使用UDP-N-乙糖胺作为内部标准.
- 验证了该方法的线性,精度 (日内和日间),恢复和矩阵效应.
- 在各种储存条件下评估了DBS样本中GALT活性的稳定性.
- 研究了不同采血管 (K2EDTA,肝素) 和反应停止方法的影响.
主要成果:
- 这种LC-MS/MS方法表现出极好的线性 (0.4-50μM) 和精度 (%CV <15).
- 恢复研究显示,在没有显著的矩阵离子抑制的情况下,效率超过90%.
- 在经过测试的储存条件下,DBS样品在31天内保持稳定.
- LC-MS/MS方法为非常低的GALT活性水平提供了定量结果,与计方法不同,该方法报告的值为<3.5 U/g Hb.
结论:
- 开发的LC-MS/MS方法是一种可靠而敏感的工具,用于测量DBS样本中的GALT活性.
- 这种测定方法比度法提供了与度方法相比,更好的量化检测GALT缺乏症.
- 该方法支持 galactosemia 的准确诊断,并促进新生儿查计划.
