通过毛细血管电泳,对三种复合人体胰岛素的除化进行比较研究
M Andrasi1, G Vishwakarma1, R Szabo1
1Department of Inorganic and Analytical Chemistry, University of Debrecen, Egyetem ter 1., Debrecen H-4032, Hungary.
Journal of chromatography. A
|August 13, 2023
概括
毛细管区域电泳 (CZE) 能够有效地分离重组人体胰岛素及其脱化形式,即使是那些质量或形状差异最小的胰岛素. 这种方法对于分析胰岛素稳定性和降解产品至关重要.
科学领域:
- 分析化学 分析化学
- 生物化学 生化学
- 制药科学 制药科学
背景情况:
- 再组合人体胰岛素是关键的治疗方法,但它们的稳定性可能会受到脱化的影响.
- 分析除甲基化胰岛素异型是确保药物安全性和疗效的关键.
- 毛细管区电泳 (CZE) 为复杂的蛋白质混合物提供了高分辨率的分离能力.
研究的目的:
- 评估CZE在分离复合人体胰岛素及其脱胺异型的适用性.
- 为了研究氨基酸序列差异对胰岛素脱氨基化过程的影响.
- 确定胰岛素异型分离和检测的最佳条件.
主要方法:
- 毛细管区域电泳 (CZE) 用于分离.
- 用紫外线和电喷射电离-质谱法 (ESI-MS) 检测分析了胰岛素异型.
- 在各种温度和pH值条件下诱导和监测了脱化.
主要成果:
- CZE成功地分离了差异仅为0.984 Da的胰岛素异型和具有相同质量但不同形状的胰岛素异型.
- 一种具有基本pH值的背景电解质增强了在裸体化的毛细血管中分离胰岛素类型和脱化形式的分离.
- 检测极限 (LOD) 的值在0.6-0.93 mg/L (UV) 和2.17-4.37 mg/L (ESI-MS) 之间.
- 在-20°C至-80°C时脱是最小的,在+5°C以上加速,在+5°C时只观察到1倍的脱.
- 在室温下化一个月后,分别对格拉吉因,格鲁素和氨酸产生了不同的除化水平 (1倍,1-2倍,1-2-3倍).
结论:
- CZE是一种强大的技术,用于解决胰岛素异型和脱胺产品之间的微妙差异.
- 基本的pH条件有利于分离胰岛素除化产品.
- 温度显著影响胰岛素脱率,较低的温度可以保持胰岛素的完整性.
