通过基于CRISPR的检测平台,对Mycoplasma pneumoniae进行快速,超敏感和高度特定的诊断

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 传染性疾病 传染性疾病
• 诊断 诊断 诊断 诊断

背景情况:

• 菌性肺炎 (MP) 引起显著的发病率和死亡率,特别是在脆弱的年龄组.
• 目前缺乏针对MP感染的准确,敏感和快速诊断方法.
• 现有的诊断工具可能不适合所有临床或现场设置.

研究的目的:

• 开发一种基于CRISPR-Cas12b的新型检测平台,与重组酶聚合酶放大 (RPA) 集成,用于诊断MP感染.
• 建立一个快速,简单和高度敏感的MP诊断测试.
• 用患者样本评估开发的试验的临床性能.

主要方法:

• 开发了MP-RPA-CRISPR测定方法,将RPA用于放大MP CARDS毒素基因和CRISPR-Cas12b用于检测.
• 优化RPA反应条件,包括温度 (37°C).
• 在96个支气管支气管洗液 (BALF) 样本上验证了试验的灵敏度 (低至5 fg MP基因组DNA),特异性和性能.

主要成果:

• 该MP-RPA-CRISPR试验显示出高灵敏度,检测到MP基因组DNA的仅为5fg.
• 该试验准确地将MP菌株与非MP菌株区分开来,没有交叉反应.
• 对96个BALF样本的临床评估显示,与微流体芯片技术完全一致,正确识别了45例MP感染者和51例非MP感染者.

结论:

• MP-RPA-CRISPR试验是一种简单,快速,便携且高度灵敏的MP感染诊断方法.
• 这种测试显示了在各种环境中使用的巨大潜力,包括临床实验室,现场应用和资源有限的地区.
• 开发的平台为及时准确诊断Mycoplasma pneumoniae感染提供了有前途的进展.