测量NLR寡合化I的方法:大小排除色谱,共免疫沉和交叉链接
Sonal Khare1, Savita Devi1, Alexander D Radian2
1Department of Academic Pathology, Department of Biomedical Sciences and Samuel Oschin Comprehensive Cancer Institute, Cedars Sinai Medical Center, Los Angeles, CA, USA.
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
|August 14, 2023
概括
用生物化学方法研究细胞信号传递至关重要的蛋白质寡合化. 这些技术,包括共免疫沉和大小排除色谱,检测炎症细胞复合体的形成和激活.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 分子生物学分子生物学
- 细胞信号传输 细胞信号传输
背景情况:
- 蛋白质寡合化是调节细胞反应的基本机制.
- NLRs (NOD类受体) 的寡合化对于形成信号平台至关重要.
- 生物化学技术可以检测NLR寡合化,并与功能性检测相结合.
研究的目的:
- 详细说明在人类巨细胞中分析NLRP7寡合化的方法,在黄金葡萄球菌感染时.
- 为了证明NLRP7和NLRP3炎症组复合体的共免疫沉降和免疫阻塞.
- 评估酶-1活性和ASC寡合化作为炎症酶激活的读数.
主要方法:
- 尺寸排除色谱 (SEC) 用于分离原生蛋白质复合体.
- 同免疫沉 (co-IP) 用于净化NLR复合物和相关蛋白质.
- 原生凝电泳和化学交叉链接用于检测寡合物状态.
- 卡斯帕酶-1活性测定和免疫斑块分析.
主要成果:
- 提供了对人类巨细胞NLRP7寡合化分析的详细方法.
- 通过共同IP和免疫阻塞分析NLRP7和NLRP3炎症组复合体.
- 在不同的细胞类型中,观察到ASC寡合化反应于各种刺激.
结论:
- 生物化学方法有效地检测和分析炎症体信号传递中的蛋白质寡合化.
- 这些技术对于研究炎症酶激活对病原体和危险信号的反应是有价值的.
- 描述的方法有助于研究NLR介导的细胞反应.
关键词:
蓝色原生电泳是一种电泳.卡斯巴-1活性测定.共同免疫性沉的发生.交叉链接是指交叉链接.在炎症中,一些细胞会发炎.在NLR中,它是NLR.类似节点的受体受体.寡合化是指一种氧化物.蛋白质与蛋白质的相互作用尺寸排除色谱学 尺寸排除色谱学更多相关视频
08:22Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software
Published on: July 17, 2018
7.3K
09:04Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1β in Human Monocyte-derived Dendritic Cells
Published on: May 22, 2014
21.0K