使用热稳定性测定方法对CLIC5相互作用物的高通量分析

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分子生物学分子生物学
• 离子通道研究研究

背景情况:

• 化物细胞内通道 (CLIC) 蛋白质是独特的变形蛋白质,在各种生理和病理过程中发挥作用.
• 这一家族的成员CLIC5与遗传性聋和癌症有关,但其自然相互作用因子仍然未知.

研究的目的:

• 确定调节CLIC5.5生物化学性质和活性的配体.
• 通过发现其相互作用物来探索CLIC5相关疾病的潜在治疗途径.

主要方法:

• 在大肠杆菌中过度表达和净化CLIC5.
• 建立一个高通量差分扫描度测量热转移试验 (TSA).
• 使用TSA对大约500种自然化合物的CLIC5相互作用进行选.

主要成果:

• 开发了一种基于TSA的选方法,可同时评估每小时约100种化合物.
• 根据热稳定性确定了11种潜在的CLIC5相互作用化合物.
• 黄素通过剂量依赖性分析被确定为一种特定的CLIC5配体.

结论:

• 开发的TSA方法有效地选小分子的新型CLIC5相互作用剂.
• 识别CLIC5配体可以提供调节其活动的工具.
• 调节CLIC5活动可能为CLIC5相关的病理提供治疗策略.