再组合的人类TIM-3ectodomain在细菌中表达,并从包含体中恢复为稳定和活跃的分子

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 免疫学 免疫学 免疫学
• 分子生物学分子生物学

背景情况:

• 像大肠杆菌这样的微生物系统中的重组蛋白质生产具有成本效益,但面临着可溶性蛋白质回收的挑战,特别是膜蛋白.
• T细胞免疫球蛋白和真菌域3 (TIM-3) 是一个关键的免疫检查点受体,参与调节T细胞反应,并对各种疾病具有治疗潜力.
• 了解TIM-3生物及其配体对于开发有效的免疫疗法至关重要,但生产活性TIM-3一直很困难.

研究的目的:

• 开发一种方法,从细菌包容体中产生活性,非糖化TIM-3ectodomain (TIM-3-ECD).
• 建立TIM-3-ECD作为研究免疫检查点相互作用和功能的工具.
• 为难以生产的检查点蛋白质验证一种新的重新折叠策略.

主要方法:

• 利用细菌细胞质纳入体用于重组TIM-3ectodomain生产.
• 使用高压和性pH的组合进行蛋白质重新折叠.
• 通过结构和功能测试,对重新折叠的TIM-3-ECD进行了净化和特征化.

主要成果:

• 从细菌包容体中成功地产生了活性,非糖化TIM-3-ECD.
• 纯化的TIM-3-ECD表现出正确的二次结构,并被结构依赖抗体识别出来.
• 证明了TIM-3-ECD与肺癌细胞的结合,以及其增强淋巴细胞激活标志物表达的能力.

结论:

• 验证了一种用于从细菌包容体中获得活性免疫检查点蛋白的新方法.
• 开发的TIM-3-ECD是研究免疫检查点相互作用的功能工具.
• 这种方法有助于进一步研究TIM-3和其他尚未探索的免疫检查点.