使用反转录循环介导的异热放大-合CRISPR-Cas12试验,对黄病毒进行敏感和视觉检测
Tengzhi Xu1, Xiaolan Yang1, Xia Feng1
1Institute of Crop Protection, College of Agriculture, Guizhou University, Guiyang 550025, China.
Phytopathology
|August 17, 2023
概括
一种新的测定方法将反转录循环介导的同热放大 (RT-LAMP) 与CRISPR/Cas12a相结合,用于敏感的布拉西卡黄色病毒 (BrYV) 检测. 这种快速,便携式的方法为现场植物病毒监测提供了更高的准确性.
科学领域:
- 植物病毒学 植物病毒学
- 分子诊断学 分子诊断学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 棕黄病毒 (BrYV) 对十字植物作物构成重大经济威胁.
- 准确和快速的检测方法对于管理BrYV疫情至关重要.
研究的目的:
- 开发一种高度敏感和特定的诊断试验,用于BrYV检测.
- 创建适合现场应用的便携式快速方法.
主要方法:
- 开发一种单反转录循环介导的同热放大 (RT-LAMP) 试验.
- 集群定期间隔的短时间palindromic重复 (CRISPR) /Cas12a系统的整合,用于增强检测.
- 在63°C时稳定CRISPR/Cas12a试剂用于便携式使用.
主要成果:
- 在RT-LAMP-CRISPR/Cas12a试验中,该试验的检测极限为32.8个BrYV ORF5副本,比RT-LAMP单独检测的100倍敏感.
- 已证明具有高特异性,对其他相关RNA病毒没有交叉反应.
- 在实地测试中,该测定结果被证明是准确的,并且比RT-LAMP和RT-PCR更敏感.
- 结果可以在1小时内获得,并使用紫外线灯可视化.
结论:
- 开发的RT-LAMP-CRISPR/Cas12a检测方法为BrYV检测提供了一种方便,便携,快速,低成本和高度敏感的方法.
- 这种测试具有在农业环境中对BrYV的现场监测和管理的巨大潜力.
