使用基于近距离的NanoBRET测定方法测量活细胞中BRAF自身抑制的协议
Russell Spencer-Smith1, Deborah K Morrison1
1Laboratory of Cell and Developmental Signaling, Center for Cancer Research, National Cancer Institute-Frederick, Frederick, MD 21702, USA.
STAR protocols
|August 17, 2023
概括
研究人员开发了一种新的NanoBRET试验,可以实时在活细胞中测量BRAF自身抑制. 这种方法对于了解癌症和RASopathy综合征中的BRAF激活至关重要.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 在人类癌症和RASopathy综合征中,BRAF突变很常见.
- 激活BRAF需要缓解其调节和催化领域之间的自身抑制相互作用.
研究的目的:
- 开发和介绍一种基于近距离的NanoBRET试验,用于实时测量活细胞中BRAF自身抑制.
- 为使用这种测定提供详细的协议.
主要方法:
- 使用基于近距离的NanoBRET (生物发光共振能量转移) 试验.
- 细胞播种,转染,复合和纳米BRET排放读数的详细程序.
- 在测试后确认了蛋白质表达.
主要成果:
- 成功建立了一个NanoBRET试验,用于实时监测BRAF自身抑制.
- 通过测试演示了细胞处理和数据采集的协议.
结论:
- 开发的NanoBRET试验为研究活细胞中BRAF自身抑制动态提供了一个新的工具.
- 这种测定有助于研究BRAF相关疾病,包括癌症和RAS.


