在D. melanogaster自然种群中进行可移植元素删除的两步CRISPR-Cas9协议
Miriam Merenciano1, Laura Aguilera1, Josefa González1
1Institute of Evolutionary Biology, CSIC, UPF, 08003 Barcelona, Spain.
STAR protocols
|August 17, 2023
概括
这项研究详细介绍了一种CRISPR-Cas9方法,用于精确地删除Drosophila melanogaster.中的可移植元素. 该协议确保不改变遗传背景,促进同卵性突变菌株的产生.
科学领域:
- 遗传学 是一个遗传学.
- 分子生物学分子生物学
- 果虫研究研究 果虫研究
背景情况:
- 可转移元素 (TE) 是可改变基因组的移动遗传序列.
- 对于遗传学研究来说,精确删除TEs而不会产生异常效应至关重要.
- 了解自然种群中的TE动态需要强大的遗传工具.
研究的目的:
- 提出一种用于精确删除Drosophila melanogaster中可转移元素的新方案.
- 为了能够用光标记器取代可转换元件,并随后删除标记器.
- 为了促进基因分析的同卵性突变菌株的生成.
主要方法:
- 使用一个两步的CRISPR-Cas9同质导向修复策略.
- 采用单导向RNA,修复等离子体和微注射来进行精确的基因修改.
- 实施查方法以确认TE删除并产生同卵性突变物.
主要成果:
- 在Drosophila melanogaster中成功生成精确的可转移元素删除.
- 展示标记物更换和随后的移除技术.
- 建立一个创建同卵性突变菌株的协议.
结论:
- 提出的协议提供了一种可靠的方法,用于在Drosophila.针对性的TE删除.
- 这种技术允许在可转移元素操纵过程中保存遗传背景.
- 该协议对于研究可移植元素的功能和对自然种群的影响是有价值的.
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