在使用电孔Cas9-sgRNA复合体的初级骨髓衍生的巨中高效基因干扰

科学领域:

• 免疫学 免疫学 免疫学
• 分子生物学分子生物学
• 遗传学 是一个遗传学.

背景情况:

• 骨髓衍生巨细胞 (BMDMs) 对于研究组织巨细胞生物学至关重要.
• 与细胞系相比,初级BMDM提供了优越的体内生理模型.
• 在BMDM中进行基因操纵是必不可少的,但在技术上具有挑战性.

研究的目的:

• 在小鼠BMDM中建立一个有效的CRISPR/Cas9基因组编辑协议.
• 通过框架转移突变实现针对性的基因功能破坏.
• 提供一种精简的方法来对主要巨细胞进行基因改造.

主要方法:

• 单导向RNA (sgRNA) -Cas9核糖蛋白复合体 (RNP) 的合成.
• 通过电穿孔将RNP输入BMDM.
• 使用桑格序列和在线分析工具监控编辑效率.

主要成果:

• 实现了高编辑效率,从85%到95%.
• 协议是快速的,可以在一周内完成.
• 不需要等离子体构造,简化工作流程.

结论:

• 开发的协议提供了一种有效和可访问的方法,用于在BMDM中进行CRISPR/Cas9基因组编辑.
• 这种技术有助于在原发性巨细胞中进行功能遗传研究.
• 该协议增强了BMDMs作为巨细胞研究模型系统的实用性.