流量细胞测量分析的应用,用于测量3D大脑器官中的多个线粒体参数
Sharika Marjan1, Tsering Yangzom1, Cecilie Katrin Kristiansen2
1Department of Clinical Medicine (K1), University of Bergen; Centre for International Health, Department of Global Public Health and Primary Care, University of Bergen.
Journal of visualized experiments : JoVE
|August 17, 2023
概括
研究人员开发了一种新的流动细胞计法,用于分析人类大脑有机体中的线粒体健康状况. 这种技术有效地测量了线粒体质量,呼吸链复合体和DNA拷贝数,有助于神经退行研究.
科学领域:
- 神经科学是一个神经科学.
- 细胞生物学 细胞生物学
- 生物化学 生物化学
背景情况:
- 线粒体功能障碍是神经退行性疾病的关键因素.
- 来自诱导多能干细胞 (iPSC) 的人类大脑器官提供了一个复杂的模型来研究大脑发育和疾病.
- 目前用于分析有机体中线粒体参数的方法有限.
研究的目的:
- 建立基于流细胞计的协议,用于评估iPSC衍生的皮质器官中的多个线粒体参数.
- 为了同时量化线粒体质量,呼吸链复杂水平和线粒体DNA (mtDNA) 拷贝数.
主要方法:
- 从iPSC产生皮质大脑器官.
- 有机体的单细胞解离,然后进行固定和染色.
- 使用抗体对线粒体呼吸链 (MRC) 复杂子单元 (例如,NDUFB10,TFAM) 和VDAC1.1进行双染色的流细胞计分析.
主要成果:
- 为快速 (2-3小时) 和全面分析线粒体参数建立了一个协议.
- 该方法允许评估每个线粒体的特定蛋白质水平 (NDUFB10,TFAM).
- TFAM水平提供了与线粒体含量相对的mtDNA拷贝数的间接估计.
结论:
- 这种流细胞计方法为人类大脑器官中的多参数线粒体分析提供了强大的工具.
- 该技术有助于研究神经退行症中的线粒体功能障碍,并选潜在的治疗方法.
- 这种方法增强了iPSC衍生的脑器官的实用性,作为神经疾病研究的复杂模型.
