优选排斥色谱作为从附着物和悬浮物生产中的细胞外AAV收获的捕获步骤
Maja Leskovec1, Andrej Raspor1, Veronika Fujs1
1Sartorius BIA Separations d.o.o., Ajdovščina, Slovenia.
Electrophoresis
|August 20, 2023
概括
优选排除染色体 (PXC) 有效地从细胞外收获净化腺相关病毒 (AAV). 这种方法提供了高回收率,可以成为AAV净化过程中的关键第一步.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 生物化学 生物化学
- 病毒学 病毒学
背景情况:
- 优选排斥色谱 (PXC),也称为疏水性相互作用色谱,是一种成熟但未得到充分利用的基相关病毒 (AAV) 净化技术.
- 高盐度,PXC的特征,可以导致样本聚合,这对净化构成挑战.
研究的目的:
- 探索PXC作为初始染色学步骤的有效性,用于缩和净化细胞外AAV.
- 为了优化PXC用于附着和悬浮AAV收获,使用单立柱.
主要方法:
- 采用具有单体CIMmultus柱的优先排斥色谱 (PXC) 用于AAV净化.
- 开发和优化PXC条件,包括盐度和柱管道大小,用于悬浮和附着AAV9收获.
- 使用滴滴数字聚合酶链反应 (ddPCR) 进行量化载体基因组恢复.
主要成果:
- 实现了高载体基因组恢复率,悬浮的84%,粘附的AAV9收获的97%.
- 从澄清的收获到离子交换化,证明了整体过程载体基因组恢复率为54%.
- 将宿主细胞残留DNA减少到每1E13载体基因组的40ng,最终分数中空的AAV不到5%.
结论:
- PXC是一种可行的和有效的血清型独立的第一步,用于从细胞外收获中缩和净化AAV.
- 优化PXC条件,包括更高的盐度和特定的列格式,对于处理更复杂的悬浮收获至关重要.
- 结合PXC和离子交换色谱的方法产生高纯度的AAV,具有良好的回收和低水平的污染物.
