可以在固定的大脑组织上进行凝纤维图
Zhenzhou Chen1, Dennis Chuang2,3, Shanyan Chen2
1Department of Neurosurgery, The National Key Clinical Specialty, The Engineering Technology Research Center of Education Ministry of China on Diagnosis and Treatment of Cerebrovascular Disease, Guangdong Provincial Key Laboratory on Brain Function Repair and Regeneration, Zhujiang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou, China.
用乙醇,乙,基固定剂 (ZBF) 或短时间的偏甲 (PFA) 固定小鼠大脑组织,可以保持凝酶活性. 固定的组织需要特定的蛋白质提取方法,以使凝细胞学成为可能.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 组织化学 组织化学
- 神经科学是一个神经科学.
背景情况:
- 凝酶谱是检测凝酶活性的标准,通常在新鲜组织上,因为人们担心固定不活化的酶.
- 固定组织提供了诸如预防衰变和保存形态等优势,但它们在生殖图中的使用受到酶失活恐惧的限制.
研究的目的:
- 研究常见固定剂 (乙醇,乙,ZBF,PFA) 对小鼠大脑组织中的凝溶解活性的影响.
- 确定有效的蛋白质提取协议,用于固定大脑组织,以保持酶活性.
主要方法:
- 用乙醇,乙,ZBF和PFA固定小鼠的大脑组织.
- 使用各种溶液 (Triton,DMSO,尿素,CHAPS,SDS) 进行了蛋白质提取.
- 评估了凝酶活性和蛋白质存在,使用现场凝图 (ISZ) 和西部凝/凝凝图 (IGZ).
主要成果:
- 乙醇,乙,ZBF和短期PFA固定没有抑制ISZ检测到的凝分解活性.
- 尿素/CHAPS和SDS溶液有效地从某些固定组织中提取凝酶蛋白,同时保持活性.
- 用加热的SDS从所有固定剂中提取了蛋白质,但取消了凝溶解活性.
结论:
- 在固定的大脑组织上,可以进行凝细胞图 (ISZ和IGZ),克服使用新鲜组织的局限性.
- 优化的蛋白质提取协议对于在固定标本中成功分析凝酶活性至关重要.
- 这种方法比传统的腹腔镜图带来了改进,因为它可以对保存的组织结构进行分析.
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