在大肠杆菌中优化复合TNFα的产生,使用GFP融合和流细胞计

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 分子生物学分子生物学
• 生物工艺工程 生物工艺工程

背景情况:

• 大肠杆菌是重组蛋白质生产的关键宿主,但由于蛋白质特定要求,优化具有挑战性.
• 需要快速可靠的方法来加速生物制药制造工艺的发展.
• 绿色光蛋白 (GFP) 融合为实时监测蛋白质数量和折叠提供了一个潜在的解决方案.

研究的目的:

• 为了优化使用GFP融合的复合人体瘤亡因子α (rhTNFα) 的产生.
• 评估流细胞计对评估蛋白质生产和培养异质性的有用性.
• 为了比较重组蛋白表达的不同表达系统 (T7和pBAD).

主要方法:

• 利用GFP融合来监测大肠杆菌中rhtNFα的产生.
• 采用流式细胞计量用于光和细胞活性的单细胞分析.
• 将GFP融合光数据与SDS-PAGE和亚细胞分离等传统方法进行比较.
• 将优化的摇瓶条件转移到高细胞密度生物反应器培养物中.

主要成果:

• 使用GFP融合的光测量与传统的,更耗时的方法有很好的相关性.
• 流细胞计提供了对培养异质性和细胞活性的见解.
• 优化的摇瓶条件已成功扩展到生物反应器培养物.
• 在T7和pBAD系统之间比较表达水平.

结论:

• 与流细胞计结合的GFP融合显著加快了重组蛋白质生产的过程发展.
• 这种方法可以快速评估蛋白质数量,折叠状态和培养性能.
• 该方法适用于优化Escherichia coli中的多种复合蛋白标.