在Pichia pinkTM表达系统中克隆的Aspergillus flavus尿酶的高产量的表达和净化
Behrouz Mahmoudi1,2, Fatemeh Soleimanifar1, Sadeq Shabani3
1Department of Medical Biotechnology, School of Medicine, Alborz University of Medical Sciences, Karaj, Iran.
3 Biotech
|August 22, 2023
概括
研究人员优化了Pichia pink中的Aspergillus flavus尿酶基因,以提高酶的产生. 这种重组尿酶具有高纯度和活性,表明其具有治疗和诊断用途的潜力.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 酶工程是什么? 酶工程是什么?
背景情况:
- 尿酶对于代谢尿酸至关重要.
- 再组合尿酶的高效生产对于治疗应用至关重要.
- 皮奇亚粉红色表达系统为异质蛋白质生产提供了一个强大的平台.
研究的目的:
- 在Pichia粉红色表达系统中克隆和优化Aspergillus flavus尿酶基因.
- 为了实现复合尿酶的高水平表达和净化.
- 评估复合尿酶在诊断和治疗应用中的潜力.
主要方法:
- 优化了A. flavus尿酶基因的.
- 在酒精氧化酶促进剂下克隆到pPink-UOX等离子体中.
- 在Pichia粉红酵母中表达,然后在5L生物反应器中发酵.
- 使用序列离子交换和疏水相互作用色谱进行净化.
- 使用SDS-PAGE,RP-HPLC和大小排除色谱分析纯度和活性.
主要成果:
- 在Pichia pink.中成功克隆并表达了对子优化的A. flavus uricase基因.
- 达到2.5g/L的高酶产量和24U/mg的特异活性.
- 纯化重组尿酶的纯度>99%,在异质性方面与拉斯布里卡斯相似.
- 证明了重组尿酶生产的63%的总产量.
结论:
- 皮奇亚的粉红色表达系统能够在高水平上产生活性和纯复合尿酶.
- 标志性复合尿酶表现出适合潜在治疗和诊断应用的特性.
- 这项研究为开发新型尿酸降低疗法和诊断工具提供了基础.
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